Estudio de biocompatibilidad con células osteoblásticas

Estudio de biocompatibilidad con células osteoblásticas

El objetivo del ensayo es estudiar la biocompatibilidad de los implantes MPI en presencia de células osteoblásticas MG-63 de osteosarcoma humano.

Esta prueba ha sido realizada por el Centro Nacional de Microscopía Electrónica (CNME) de la Universidad Complutense de Madrid.

Para evaluar la citotoxicidad de los implantes, se ponen en contacto con células humanas durante un tiempo determinado tras el cual se realiza una evaluación de las células que han estado en contacto con ellos.

Tanto la viabilidad celular como los estudios de extensión y colonización celular se han determinado a través de observación mediante microscopía electrónica de barrido (SEM) y microscopía confocal. Se estudió el crecimiento celular sobre el implante añadiendo una solución de Alamar Blue (AbDSerotec, Oxford, Reino Unido) al 10% (v/v) a los 3, 6 y 10 días, siguiendo las instrucciones del fabricante. La intensidad de absorbancia resultante se midió a 570/600 nm en un espectrofotómetro UV-visible Unicam UV-500.

Los estudios SEM se realizaron tras un periodo de incubación del implante con células osteoblásticas de 15 días, tras fijación con glutaraldehído al 2,5% y deshidratación gradual con soluciones crecientes de etanol / PBS (30, 60, 80, 90 y 95%) y posterior secado en horno de vacío durante 4 días. La observación por SEM se llevó a cabo en un microscopio de barrido de emisión de campo JEOL-JSM-6335F operando a 10 kV (Tokio, Japón).

Para los estudios de microscopía confocal, los implantes se incubaron con las células de osteoblastos durante 15 días. Antes del estudio, las muestras se fijaron con paraformaldehído al 4% y se tiñeron con DAPI y Atto 656-faloidina, con el fin de teñir los núcleos de las células y el citoesqueleto celular, respectivamente. La observación por microscopía confocal se realizó en un microscopio Olympus FV1200.

Los resultados obtenidos muestran una buena biocompatibilidad del implante en presencia de células osteoblásticas. Los resultados de viabilidad celular analizados muestran que las células se adhieren y proliferan en todo el implante, y que este crecimiento celular aumenta con el tiempo, hasta 10 días.

Los estudios de extensión celular y colonización del implante por SEM se realizaron en la zona rugosa del implante, mostrando una colonización total de las células en toda la superficie del implante con adecuada extensión celular mediante la proyección de filopodios como elementos de anclaje celular. 

Los estudios de microscopía confocal confirman estos resultados, mostrando en la imagen un grupo de células bien desarrolladas con la actina del citoesqueleto organizada en forma de haces paralelos, concluyendo que las células están completamente extendidas.

Estudio de biocompatibilidad con células osteoblásticas